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摘要:目的 体外检测卵巢癌患者血中CA125对细胞免疫功能的影响。方法 收集2012年5月至2013年6月北京协和医院符合诊断标准的卵巢癌患者58例, 按CA125浓度分为3组; 同时收集良性妇科疾病患者20例及体检正常的健康者20名作为对照。应用细胞培养、酶联免疫吸附法、酶联免疫斑点(enzyme-linked immunospot, ELISPOT)等实验, 观察体外刺激健康人淋巴细胞产生γ-干扰素(interferon-γ, IFN-γ)的能力, 判断CA125对机体细胞免疫状态的影响。结果 在卵巢癌患者中, 随CA125水平升高, 淋巴细胞绝对值及百分比值呈逐渐下降趋势。高浓度CA125卵巢癌患者的血清与植物血凝素共同刺激健康者混合淋巴细胞后, 培养上清液中IFN-γ的含量[(36.16±16.89)ng/ml]较阳性对照组和低浓度CA125组[分别为(45.68±18.01)和(46.22±19.30)ng/ml]显著降低(P < 0.05);ELISPOT结果显示高浓度和中浓度CA125(斑点数均值分别为108.2和371.6)对细胞免疫抑制功能与健康对照组和良性疾病组(斑点数均值分别为573.0和523.0)比较, 差异均有统计学意义(P < 0.01, P < 0.05);而去除血清中CA125后, 对细胞免疫抑制作用明显减弱。结论 卵巢癌患者体内的CA125水平与淋巴细胞的数量、活性及其产生细胞因子的活性呈负相关关系。CA125除作为与卵巢癌相关的标志物外, 还可能是一种细胞免疫抑制因子。Abstract:Objective To detect the effects of CA125 on cellular immune function of the ovarian cancer (OC) patients in vitro.Methods Totally 58 patients with confirmed OC in our hospital from May 2012 to June 2013 were divided into three groups based on the CA125 levels. Meanwhile, 20 healthy subjects(control group) and 20 patients with benign gynecological diseases (benign diseases group) were also included. The in vitro ability of healthy human lymphocytes in secreting interferon-γ (IFN-γ) under the stimulation of phytohemagglutinin(PHA) was observed by cell culture, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and enzyme-linked immunospot (ELISPOT).Results In OC patients, the count and percentage of lymphocytes decreased gradually with elevated levels of CA125. The concentration of IFN-γ in the supernatant of cultured lymphocytes from healthy individuals decreased significantly under the stimulation of PHA and high concentration of CA125[(36.16±16.89)ng/ml]compared with that of PHA alone [(45.68±18.01)ng/ml] or PHA and low concentration of CA125 [(46.22±19.30)ng/ml](both P < 0.05). Compared with the control group(spots number 573.0) and the benign diseases group(spots number 523.0), the high(spots number 108.2) and intermediate(spots number 371.6) concentration of CA125 had significant inhibitory effect on the cellular immune system, as detected by ELISPOT (P < 0.01, P < 0.05, respectively). After removal of CA125 from the serum by antibody, the inhibitory effect was weakened significantly.Conclusions The concentration of CA125 in OC patient is negatively correlated with the number and activity of lymphocytes, in particular their abilities in releasing cytokines. CA125 is not only a biomarker of OC but also may serve as an immunosuppressive factor.
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Keywords:
- CA125 /
- ovarian cancer /
- lymphocyte /
- cytokine /
- interferon-γ
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目前, 我国每年新增肝癌患者数约占全世界新增肝癌的54%[1], 年死亡率20.4 /10万人, 占全世界肝癌死亡人数的40%。而肝脏占位的早期正确诊断是选择合适的治疗方案, 改善疾病预后的关键。临床上通过各种血清学检查、超声、CT和MRI及相关增强影像, 可使绝大多数肝脏占位能在术前明确性质, 但仍有少部分肝脏占位通过上述检查不能做出诊断, 给治疗方案的制定带来了一定的困难。本研究选取40例经全面术前检查仍不能明确诊断, 同时又有条件进行两次不同正电子发射计算机断层显像(positronemissiontomography, PET)检查的肝脏占位患者, 比较18 F-去氧葡萄糖(18 F-fluorodeoxyglucose, 18 F-FDG)和11 C-乙酸盐(11 C-Acetate)两种示踪剂PET对肝脏占位诊断的价值。
对象和方法
对象
从本科2004年10月至2010年8月经术前血清学检查, 如甲胎蛋白(α-fetoprotein, AFP)测定、B超、CT、MRI及相关增强技术仍无法明确诊断的肝脏占位患者中选取40例纳入本研究, 于术前行18 FFDG和11 C-Acetate两种示踪剂PET检查。40例患者中, 男性30例, 女性10例; 年龄31 ~ 74岁, 平均55.1岁。HBsAg(+)患者24例, HCV (+) 3例。术前肝功能分级:ChildA级37例, ChildB级3例。病例选取条件:(1)检查前均未行手术、放疗、化疗及其他治疗; (2)血清学检查、B超、CT、MRI及相关增强技术未能明确占位性质, 但临床高度怀疑恶性肿瘤; (3)全身情况、肝功能可耐受相应切除范围的手术。
方法
所有患者在行PET前均签署知情同意书, 分别在第1天和第2天空腹6 h后接受18 F-FDG-PET和11C-Acetate-PET扫描, 所用仪器为SIEMENS/CTIEXACTHR+。分别在静脉注射18 F-FDG后1 h、静脉注射11C-Acetate后10 min为扫描点, 根据肿物放射性曲线所得到的SUV值与等面积的正常肝脏组织SUV值比较, 比值≤1.0提示良性, >1.0提示恶性可能性大。
统计学处理
采用SPSS12.0统计软件, 分类变量比较采用χ2检验或配对χ2检验, 可信区间95%, P < 0.05表示差异有统计学意义。
结果
40例肝脏占位患者中39例行手术治疗, 1例经皮肝穿刺获取肿物组织。
术后病理结果
术后病理证实:40例肝脏占位患者中原发性肝细胞肝癌28例, 肝内胆管细胞癌3例, 肝血管肉瘤1例, 恶性神经内分泌肿瘤1例, 肝硬化结节伴不典型增生2例, 血管平滑肌脂肪瘤1例, 海绵状血管瘤1例, 局灶性结节性增生(FNH) 1例, 胆囊黄色肉芽肿2例。在35例恶性肿瘤和癌前病变中, 低分化7例, 中低分化5例, 中分化9例, 中高分化4例, 高分化8例, 不典型增生2例。
术前影像学及PET扫描结果
术前影像学及PET扫描结果显示:经术后病理证实的35例恶性肝脏病变和癌前病变中34例均显示病变局限于肝脏组织, 1例显示有门脉转移; 其中18F-FDG诊断恶性20例, 良性15例, 18 F-FDG对恶性病变的敏感性为57.1%, 阳性预测值为100%; 11 C-Acetate诊断恶性病变29例, 良性病变6例, 11 CAcetate对恶性病变的敏感性为82.9%, 阳性预测值为90.6%;而联合双示踪剂诊断恶性病变34例, 良性病变1例, 其对恶性病变的敏感性为97.1%, 阳性预测值为91.9%, 双示踪剂联合应用敏感性明显增加(表 1)。
表 1 肝脏占位患者正电子发射计算机断层显像结果
35例恶性肝脏病变和癌前病变中, 肿瘤最大直径 < 3 cm者18例, PET发现17例; 肿瘤最大直径≥3 cm者17例, PET发现15例, 双示踪剂PET检测小肝癌与非小肝癌发现率比较差异无统计学意义(χ2检验, χ2 =0.430, P=0.512) (表 2)。
表 2 恶性肝脏病变和癌前病变大小与正电子发射计算机断层显像结果
两种示踪剂对不同分化程度恶性肿瘤的阳性显示率不同。对于不典型增生、高分化及中高分化肝脏恶性肿瘤, 11 C-Acetate的敏感性为100%, 18F-FDG的敏感性为28.6%, 两者比较差异有显著统计学意义(配对χ2检验, χ2 =8.100, P < 0.01)。而对于低分化、中低分化肝脏恶性肿瘤, 11C-Acetate的敏感性为58.3%, 18 FFDG的敏感性为75.0%, 两者比较差异无统计学意义(配对χ2检验, χ2 =2.857, P=0.091) (表 3)。
表 3 肝脏占位病理分化程度和正电子发射计算机断层显像结果
讨论
PET是目前唯一可以了解组织分子生物学代谢改变的影像技术。通过不同的示踪剂, PET显像能体现细胞内不同分子的代谢信息, 为诊断提供依据。有报道显示PET对于原发肿瘤不明的诊断敏感性达84% ~ 93.6%[2-3], 但对肝脏原发性肿瘤诊断的报道结果并不一致, 甚至存在40% ~ 50%的假阴性率[4-7]。本研究对常规检查不能确诊的肝脏占位患者, 试图通过两种不同的PET检查以提高肝癌的术前诊断率, 并依据PET示踪剂的生物学代谢特点判断肿瘤的分化程度。
应用18 F-FDG做为PET示踪剂, 可以评价细胞内糖类的代谢。在过去的10余年中, 18 F-FDG-PET已成功地用于区分良性病变和恶性肿瘤、判定肿瘤复发、指导肿瘤分期等[6]。但在部分肝细胞肝癌中, 糖酵解并非最佳代谢途径, 其与间质组织或正常肝脏细胞类似, 因此应用PET诊断时容易出现误诊[4, 7-8]。本研究结果显示, 18 F-FDG-PET诊断肝脏恶性肿瘤的敏感性为57.1%, 阳性预测值为100%, 显示出其临床应用价值。事实上, 18 F-FDG在细胞中的代谢取决于磷酸酶和葡萄糖-6-磷酸酶的活性。在正常肝组织和分化程度好的肝细胞肝癌中, 葡萄糖-6-磷酸酶水平相对较高, FDG磷酸盐的去磷酸化相对较快, FDG在细胞内的蓄积较少[9], 因而对于分化程度好的肝癌, 18 F-FDG-PET显像与周围肝组织类似, 从而降低了其敏感性[4, 8]。本研究结果也提示, 18 F-FDG-PET检测不典型增生、高分化、中高分化肝脏恶性肿瘤的敏感性较低, 仅为28.6%;而对于低分化和中低分化肝脏恶性肿瘤, 其敏感性可高达75.0%。
11 C-Acetate作为示踪剂是近年来才开始在PET中应用的, 其首先应用于心血管、神经、泌尿系统的疾病诊断[10]。11 C-Acetate是β氧化的代谢底物, 脂肪酸和胆固醇的前体[11], 通过细胞的脂肪酸合成而进入肿瘤组织。已有文献证实11 C-Acetate-PET能用于多种恶性肿瘤的定性诊断。目前国际上应用11 C-Acetate- PET诊断肝脏肿瘤正处于起步阶段[4-5, 12-13], 在国内除本研究小组前期的报道外[14-15], 尚很少有类似报道。本研究结果显示, 11 C-Acetate-PET诊断肝脏恶性肿瘤的诊断敏感性为82.9%, 阳性预测值为90.6%, 与Ho及Park等[4, 13]报道类似, 显示出Acetate对于疑难肝脏占位的高敏感性。另一方面, 11 C-Acetate- PET对于不典型增生、高分化和中高分化肝脏恶性肿瘤的诊断敏感性为100%, 且与18 F-FDG-PET比较具有显著差异, 提示其有可能弥补18 F-FDG-PET对于中高分化程度恶性肿瘤敏感性低的劣势[8]; 而对于低分化和中低分化肝脏恶性肿瘤, 其敏感性仅为58.3%, 低于18 F-FDG-PET, 但两者比较差异无显著统计学意义, 这可能受限于病例数较少。
两种PET示踪剂的代谢方式不一样, 因此联合应用18F-FDG和11 C-Acetate进行PET扫描, 或许可以起到相互补充的作用。本研究结果显示。联合应用两种示踪剂的敏感性为97.1%, 阳性预测值为91.9%, 提高了肝脏恶性肿瘤的术前诊断率; 且两者联合应用, 有可能提示肿瘤的分化程度, 更好地指导诊断和治疗[4, 13]。
如前所述, PET检查主要取决于肿物组织内的分子代谢, 而非肿物体积。本研究应用双示踪剂PET检测, 对于小肝癌与非小肝癌的发现率无显著性差异。
综上, 对于临床上无法明确诊断的肝脏占位, PET检查虽然价格昂贵, 但仍显示了一定的优势。联合应用18 F-FDG-PET和11 C-Acetate-PET可以增加肝癌诊断的敏感性, 提高术前诊断率。根据两种示踪剂阳性不同, 可能提示恶性肿瘤的分化程度, 这对治疗方案的选择也有一定的指导意义。本研究尚需进一步累积病例, 以减少因样本量少而产生的偏倚。
致谢: 北京协和医院感染科实验室张丽帆医生在酶免疫斑点检测中给予了帮助，特此致谢 -
表 1 不同浓度CA125卵巢癌患者外周血淋巴细胞数量和比率(x±s)
组别 CA125
(U/ml)淋巴细胞
(×109/L)淋巴细胞
比率(%)对照组 健康对照组(n=20) 11.2±5.0 1.43±0.28 31.1±6.2 良性疾病组(n=20) 25.8±26.8 1.75±0.71 32.2±11.0 疾病组 高浓度组(n=26) 5032±1850 1.27±0.46* 21.1±13.5* 中浓度组(n=19) 1559±566 1.39±0.57 25.4±10.6 低浓度组(n=13) 526±196 1.53±0.60 26.2±12.9 与健康对照组和良性疾病组比较，*P＜0.05 
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表 2 不同浓度CA125对培养T淋巴细胞免疫抑制作用比较
组别 CA125
(U/ml)ELISPOT
斑点数均值抑制率
(%)对照组 健康对照组(n=5) 15 573.0 0 良性疾病组(n=5) 30 523.0 8.7 疾病组 高浓度组(n=5) 3000 108.2** 81.1** 中浓度组(n=5) 1000 371.6* 35.1* 低浓度组(n=5) 300 528.8 7.8 ELISPOT：酶联免疫斑点实验；与健康对照组和良性疾病组比较，*P＜0.05，* *P＜0.01
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表 3 部分血清去除CA125后的免疫相关检测结果
病例 CA125
(U/ml)抑制率(%) γ-干扰素(ng/ml) 原浓度 去除后 原浓度 去除后 原浓度 去除后 1 3106 309.9 86.2 84.8 37.3 44.6 2 3185 320.8 78.1 40.0 8.3 10.2 3 1727 389.3 87.4 84.9 54.0 55.5
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期刊类型引用(1)
1. 曾令鹏，罗侃莹，张庆，张青. 原发性肝癌CA125水平与CONUT评分的关系研究. 国际检验医学杂志. 2024(19): 2377-2381 . 
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