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一种寨卡病毒富集检测方法的性能评价

李阿茜 孔令君 刘洋 伊洁 李川 梁米芳 窦亚玲

李阿茜, 孔令君, 刘洋, 伊洁, 李川, 梁米芳, 窦亚玲. 一种寨卡病毒富集检测方法的性能评价[J]. 协和医学杂志, 2022, 13(3): 455-460. doi: 10.12290/xhyxzz.2021-0357
引用本文: 李阿茜, 孔令君, 刘洋, 伊洁, 李川, 梁米芳, 窦亚玲. 一种寨卡病毒富集检测方法的性能评价[J]. 协和医学杂志, 2022, 13(3): 455-460. doi: 10.12290/xhyxzz.2021-0357
LI Aqian, KONG Lingjun, LIU Yang, YI Jie, LI Chuan, LIANG Mifang, DOU Yaling. Evaluation of an Assay of Zika Virus Detection Without RNA Extraction[J]. Medical Journal of Peking Union Medical College Hospital, 2022, 13(3): 455-460. doi: 10.12290/xhyxzz.2021-0357
Citation: LI Aqian, KONG Lingjun, LIU Yang, YI Jie, LI Chuan, LIANG Mifang, DOU Yaling. Evaluation of an Assay of Zika Virus Detection Without RNA Extraction[J]. Medical Journal of Peking Union Medical College Hospital, 2022, 13(3): 455-460. doi: 10.12290/xhyxzz.2021-0357

一种寨卡病毒富集检测方法的性能评价

doi: 10.12290/xhyxzz.2021-0357
基金项目: 

北京市临床重点专科医学检验科卓越项目 ZK201000

详细信息
    通讯作者:

    窦亚玲, E-mail: hellodyl66@163.com

  • 中图分类号: R373

Evaluation of an Assay of Zika Virus Detection Without RNA Extraction

Funds: 

Beijing Key Clinical Specialty for Laboratory Medicine-Excellent Project ZK201000

More Information
  • 摘要:   目的  对一种无需核酸提取纯化的寨卡病毒实时荧光定量反转录PCR检测方法的性能进行评价。  方法  该检测方法基于实时荧光定量反转录PCR技术, 样本处理采用病毒富集法: 取100~200 μL待测样本, 加入112~224 μL样本处理液Ⅰ, 5~10 μL样本处理液Ⅱ, 混匀后进行离心富集(12 000 r/min, 离心半径8.6 cm, 离心5 min)。离心后弃上清液, 加入20 μL复溶缓冲液重悬沉淀; 取10 μL重悬液, 加入50 μL PCR反应液上机检测。从定量检测下限、交叉反应、抗干扰性、精密度方面评价该检测方法的性能。收集北京协和医院检验科临床样本(血清、尿液、唾液样本), 随机选取约1/5构建寨卡病毒感染模拟临床样本, 进一步评定该检测方法的性能。  结果  该检测方法对MR766、ZKC2/2016毒株的检测下限均为101半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose, TCID50)/mL; 对17种常见虫媒病原体检测结果均为阴性, 无交叉反应发生; 潜在干扰物质胆红素(15 mg/L)、血红蛋白(100 mg/L)、甘油三酯(2000 mg/L)、IgG(37.5 g/L)和EDTA-Na2(2.5 g/L)对其检测结果无干扰; 检测低、中、高浓度寨卡病毒的批次内和批次间Ct值变异系数均<10%, 精密度良好。共收集344份北京协和医院检验科临床样本, 其中构建寨卡病毒感染模拟临床样本73份。采用该检测方法对344份样本进行检测, 结果均与实际相符, 无假阳性和假阴性。  结论  寨卡病毒简单富集后再检测的方法特异性高、重复性好, 检测结果不受干扰物质的影响, 检测下限满足临床需求, 且操作简便, 但应用效果仍需在真实临床样本中进一步验证。
    作者贡献:李阿茜、孔令君负责实验设计,数据分析,论文撰写和修改;刘洋、李川参与实验设计,负责实验执行和实验结果整理;伊洁负责模拟临床样品评价部分的实验执行和数据分析;梁米芳、窦亚玲参与研究设计,并对论文进行审阅。
    利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突
  • 图  1  不同滴度ZKC2/2016毒株寨卡病毒样本的扩增曲线(A)和标准曲线(B)

    TCID50:同表 1

    表  1  病毒富集法对不同滴度寨卡病毒样本的检测结果

    毒株 病毒滴度(TCID50/mL) 检测阳性率[%, (n/N)]
    MR766 106 100(9/9)
    (非洲型) 105 100(9/9)
    104 100(9/9)
    103 100(9/9)
    102 100(9/9)
    101 100(9/9)
    100 66.7(6/9)
    10-1 11.1(1/9)
    ZKC2/2016 106 100(9/9)
    (亚洲型) 105 100(9/9)
    104 100(9/9)
    103 100(9/9)
    102 100(9/9)
    101 100(9/9)
    100 88.9(8/9)
    10-1 0(0/9)
    TCID50:半数组织培养感染剂量
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    表  2  病毒富集法检测寨卡病毒的抗干扰性评价结果

    干扰物质 干扰物质浓度 检测阳性率[%, (n/N)]
    胆红素 15 mg/L 100(3/3)
    血红蛋白 100 mg/L 100(3/3)
    甘油三酯 2000 mg/L 100(3/3)
    IgG 37.5 g/L 100(3/3)
    EDTA-Na2 2.5 g/L 100(3/3)
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    表  3  病毒富集法精密度评价结果

    毒株 病毒浓度 批次 批次内CV(%) 批次间CV(%)
    MR766 高浓度(106 TCID50/mL) 批次1 6.35 4.99
    (非洲型) 批次2 2.26
    批次3 4.13
    中浓度(104 TCID50/mL) 批次1 2.17 2.25
    批次2 2.63
    批次3 1.34
    低浓度(102 TCID50/mL) 批次1 1.94 2.15
    批次2 2.58
    批次3 1.83
    ZKC2/2016 高浓度(106 TCID50/mL) 批次1 6.31 8.31
    (亚洲型) 批次2 6.81
    批次3 7.40
    中浓度(104 TCID50/mL) 批次1 3.10 3.17
    批次2 2.99
    批次3 2.16
    低浓度(102 TCID50/mL) 批次1 3.58 3.35
    批次2 2.66
    批次3 1.06
    CV:变异系数;TCID50:同表 1
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    表  4  病毒富集法对模拟临床样本寨卡病毒的检测结果(n)

    检测结果 实际结果 总计
    阳性(+) 阴性(-)
    阳性(+) 73 0 73
    阴性(-) 0 271 271
    总计 73 271 344
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  • [1] Dick GW, Kitchen SF, Haddow AJ, et al. Isolations and serological specificity[J]. Trans R Soc Trop Med Hyg, 1952, 46: 509-520. doi:  10.1016/0035-9203(52)90042-4
    [2] Duffy MR, Chen TH, Hancock WT, et al. Zika virus outbreak on Yap Island, Federated States of Micronesia[J]. N Engl J Med, 2009, 360: 2536-2543. doi:  10.1056/NEJMoa0805715
    [3] Brasil P, Pereira JP Jr, Moreira ME, et al. Zika Virus Infection in Pregnant Women in Rio de Janeiro[J]. N Engl J Med, 2016, 375: 2321-2534. doi:  10.1056/NEJMoa1602412
    [4] Tang BL. Zika virus as a causative agent for primary microencephaly: the evidence so far[J]. Arch Microbiol, 2016, 198: 595-601. doi:  10.1007/s00203-016-1268-7
    [5] Panchaud A, Stojanov M, Ammerdorffer A, et al. Emerging Role of Zika Virus in Adverse Fetal and Neonatal Outcomes[J]. Clin Microbiol Rev, 2016, 29: 659-694. doi:  10.1128/CMR.00014-16
    [6] Klase ZA, Khakhina S, Schneider Ade B, et al. Zika Fetal Neuropathogenesis: Etiology of a Viral Syndrome[J]. PLoS Negl Trop Dis, 2016, 10: e0004877. doi:  10.1371/journal.pntd.0004877
    [7] Haddow AD, Schuh AJ, Yasuda CY, et al. Genetic characterization of Zika virus strains: geographic expansion of the Asian lineage[J]. PLoS Negl Trop Dis, 2012, 6: e1477. doi:  10.1371/journal.pntd.0001477
    [8] Landry ML, St George K. Laboratory Diagnosis of Zika Virus Infection[J]. Arch Pathol Lab Med, 2017, 141: 60-67. doi:  10.5858/arpa.2016-0406-SA
    [9] Lanciotti RS, Kosoy OL, Laven JJ, et al. Genetic and serologic properties of Zika virus associated with an epidemic, Yap State, Micronesia, 2007[J]. Emerg Infect Dis, 2008, 14: 1232-1239. doi:  10.3201/eid1408.080287
    [10] Simpson DI. Zika Virus Infection in Man[J]. Trans R Soc Trop Med Hyg, 1964, 58: 335-338. doi:  10.1016/0035-9203(64)90200-7
    [11] Medina FA, Torres G, Acevedo J, et al. Duration of the Presence of Infectious Zika Virus in Semen and Serum[J]. J Infect Dis, 2019, 219: 31-40.
    [12] Al-Soud WA, Jönsson LJ, Râdström P. Identification and characterization of immunoglobulin G in blood as a major inhibitor of diagnostic PCR[J]. J Clin Microbiol, 2000, 38: 345-350. doi:  10.1128/JCM.38.1.345-350.2000
    [13] Al-Soud WA, Rådström P. Purification and characterization of PCR-inhibitory components in blood cells[J]. J Clin Microbiol, 2001, 39: 485-493. doi:  10.1128/JCM.39.2.485-493.2001
    [14] Gourinat AC, O'connor O, Calvez E, et al. Detection of Zika virus in urine[J]. Emerg Infect Dis, 2015, 21: 84-86. doi:  10.3201/eid2101.140894
    [15] Musso D, Roche C, Nhan TX, et al. Detection of Zika virus in saliva[J]. J Clin Virol, 2015, 68: 53-55. doi:  10.1016/j.jcv.2015.04.021
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出版历程
  • 收稿日期:  2021-04-25
  • 录用日期:  2021-07-29
  • 刊出日期:  2022-05-30

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